Expressão relativa de fator semelhante a insulina (IGFI) e receptor do homômonio folículo estimulante (FSHR) em folículos e tecido ovariano de Bos primigenius (Nelore)

  • Jorge Luís Ferreira Universidade Estadual do Ceará, Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia de Sêmen, Fortaleza, CE
  • Ricardo Toniolli Universidade Estadual do Ceará, Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia de Sêmen, Fortaleza, CE
  • Ana Beatriz Graça Duarte Universidade Estadual do Ceará, Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia de Sêmen, Fortaleza, CE
  • Francine Campagnari Universidade Estadual Paulista, Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular Animal, Araçatuba, SP
  • Ariadne Padovez Boscaro Universidade Estadual Paulista, Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular Animal, Araçatuba, SP
  • Fabiane Siqueira Pazini Universidade Estadual Paulista, Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular Animal, Araçatuba, SP
  • José Fernando Garcia Universidade Estadual Paulista, Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular Animal, Araçatuba, SP
Palavras-chave: RT-PCR semi-quantitativo, expressão gênica, bovinos

Resumo

O aperfeiçoamento das técnicas que objetivam a exploração do potencial reprodutivo das fêmeas requer a compreensão mais ampla dos mecanismos de controle de desenvolvimento folicular. Uma alternativa de estudo nesta esfera, é a quantificação da expressão relativa de genes envolvidos nos processos de recrutamento, seleção e desenvolvimento folicular, pelo emprego da técnica de transcrição - reversa associado a reação em cadeia pela polimerase (RT - PCR). O presente trabalho objetivou quantificar a expressão relativa dos genes insulin-like growth factor I (IGF-I) e do receptor do hormônio folículo estimulante (FSHR), tendo como controle interno o gene da gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH). Foram utilizados ovários bovinos de animais de matadouro em diferentes fases do ciclo estral. O RNA total dos folículos e tecido ovarianos foi purificado por TRIZOL. As reações de RT-PCR foram realizadas com o "kit" SuperScriptTM First-Strand. Os produtos de PCR foram analisados em gel de agarose e as bandas submetidas à análise densitométrica. Todos os genes foram amplificados observando-se a curva exponencial de amplificação, a validação do método foi realizada através de análise de regressão, sendo estabelecido o coeficiente de amplificação (E). A expressão relativa de mRNA para cada gene de interesse foi calculada pela fórmula estabelecida por Prelle et al.12. Em todos os tecidos analisados, todos os genes foram expressos, sobressaltando-se diferenças nos diferentes ciclos estudados. Com relação os dados referentes ao coeficiente de amplificação (E), observou-se tanto para gene controle (GAPDH), como para o gene IGF-I concordância nos valores encontrados para as diferentes classes analisadas. Quanto ao gene IGF-I, a interpretação dos achados para a expressão relativa de mRNA pode está relacionada ao caráter constitutivo dessa proteína ou devido os transcritos não serem dependentes dos níveis de FSH. Observou-se diferenças na expressão relativa de mRNA de FSHR entre as classes de tecidos analisados, o que pode ser explicado pela variação do número de receptores nas células da granulosa nas diferentes fases do ciclo estral. Pode-se perceber a partir desse estudo que a técnica de RT-PCR semi quantitativo é de grande importância biotecnológica, possibilitando auxílio na compreensão da dinâmica folicular. Entretanto esses estudos devem ser ampliados com outros genes para melhor compreensão das etapas fisiológicas envolvidas na foliculogênese.

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Publicado
2002-01-01
Como Citar
Ferreira, J., Toniolli, R., Duarte, A., Campagnari, F., Boscaro, A., Pazini, F., & Garcia, J. (2002). Expressão relativa de fator semelhante a insulina (IGFI) e receptor do homômonio folículo estimulante (FSHR) em folículos e tecido ovariano de Bos primigenius (Nelore). Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 39(4), 208-212. https://doi.org/10.1590/S1413-95962002000400008
Seção
NÃO DEFINIDA