Reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real
DOI:
https://doi.org/10.11606/issn.1679-9836.v90i1p47-51Palavras-chave:
Reação em cadeia da polimerase, Transcrição reversa/genética, DNA, RNAResumo
RT-qPCR é um dos métodos de mensurar expressão gênica mais difundidos e confiáveis utilizados atualmente. Primeiro, realiza-se extração do RNAm de um grupo celular homogêneo para poder realizar a fase RT (transcrição reversa). Neste momento a enzima transcriptase reversa sintetiza o DNAc correspondente de cada fita de RNA. Em seguida inicia-se a qPCR (reação em cadeia da polimerase em tempo real), que recebe esse nome por dar resultados quantitativos (“q” de qPCR), diferentemente dos qualitativos da PCR convencional. Essa etapa caracteriza-se pela amplificação de um sítio específico no conjunto de DNAc, que ocorre, resumidamente, por meio do uso de uma DNA polimerase DNA-dependente termoestável (Taq polimerase), dois oligômeros específicos para servirem de iniciadores para a polimerase (primers) e um fluoróforo não específico de DNA (SYBR Green I, por exemplo). Conforme as cadeias duplas do DNAc-alvo vão sendo sintetizadas, o fluoróforo se liga a elas e, após ser excitado, emite luz proporcionalmente ao número de cadeias duplas. Através de análise gráfica pode-se quantificar a amostra inicial de DNAc que, na ausência de erros, é proporcional a de RNAmDownloads
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Publicado
2011-03-01
Edição
Seção
Artigos
Como Citar
Ladeira, P. R. S. de, Isaac, C., & Ferreira, M. C. (2011). Reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real. Revista De Medicina, 90(1), 47-51. https://doi.org/10.11606/issn.1679-9836.v90i1p47-51